腸道病毒所致各系統(tǒng)感染檢查
一、檢查：
1.周圍血象 白細胞計數(shù)大多正常，在某些腸道病毒感染時可增高，中性粒細胞也可增多。
2.病毒分離 一般都采取咽拭及糞便作病毒分離和檢定，尚可從病人的腦脊液、胸水、心包積液、血液、皰漿以及活檢或尸檢取得的組織中分離到病毒。標本取得后，應立即送檢?？山臃N于猴腎、人胚腎、人羊膜、人二倍體或Hela細胞、KB傳代細胞中進行組織培養(yǎng)，觀察細胞病變。同時用多種組織培養(yǎng)細胞進行分離可提高陽性率。陽性標本再以特異型的免疫血清作中和試驗進行型別鑒定。疑有柯薩奇A組病毒感染者，應將標本經皮下、腹腔內或腦內途徑接種乳鼠進行病毒分離，因其組織培養(yǎng)陽性率不高?？滤_奇B組病毒亦可使乳鼠致病。
3.血清免疫學試驗 采取雙份血清，測定型特異抗體水平。一般可用中和試驗、補體結合試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA，酶標法）、放射免疫等法進行測定，其中以中和試驗最為可靠，中和抗體消失最慢，型特異性也較強。如恢復期抗體水平比早期有≥4倍上升，則有極大的診斷意義。但因腸道病毒型別眾多，血清學中和試驗工作量大，只有當某地一已知型腸道病毒流行時，以此法進行診斷比較理想。
4.免疫熒光快速診斷法 以熒光染色的免疫抗體來鑒定抗原可達到快速診斷的目的。但目前除在脊髓灰質炎病毒感染時應用外，在腸道病毒感染時采用不多，因需備各種型特異的免疫血清，手續(xù)繁多。最近采用許多血清型共有的VP3-ZC抗原和一種與多血清型的VP1衣殼蛋白交叉反應的單克隆抗體，改進了免疫診斷方法，但目前仍停留于研究階段。
5.核酸雜交法 由于不同血清型的腸道病毒基因組間存在同源性，特別是5′端非編碼區(qū)部分區(qū)域高度保守，故可供核酸雜交，使近年來對腸道病毒鑒定有了新的飛躍。采用探針有以下三種：①cDNA探針，以病毒RNA某一片段為模板，由逆轉錄酶催化產生，大多克隆在質粒載體中，再把帶有顯色基因（生物素或地高辛）或同位素的核苷酸摻入到新合成的cDNA鏈中去，加以標記，若將標本先經12～24小時組織培養(yǎng)可提高陽性率。②RNA探針-由于RNA是單鏈分子，故它與靶序列的雜交反應效率極高，一般用特異的轉錄載體克隆腸道病毒RNA探針，混合幾種RNA探針可使檢測病毒型更廣，RNA探針在特異性和敏感性方面都優(yōu)于cDNA探針。③寡核苷酸探針，較上述二種探針有下面優(yōu)點。因其鏈短，與等量靶位點完全雜交時間短，且可識別靶序列內一個堿基的變化，可檢測點突變，又可大量合成，價廉。此探針因選擇5′端非編碼區(qū)共同序列，故可牢固而特異地同大多數(shù)臨床常見腸道病毒結合。為了克服標本中腸道病毒滴度太低的難題，近年采用PCR法將單一基因或短DNA序列放大，再與探針雜交，此法已應用于臨床。在腸道病毒中樞神經系統(tǒng)感染流行時，從腦脊液中檢測腸道病毒RNA，陽性率高，可在24小時內得結果，比病毒培養(yǎng)平均需6～8天快得多。臨床標本用PCR擴增后，再與非同位素標記腸道病毒探針雜交，數(shù)小時即有結果，大大有助于臨床確診。
