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B因子溶血活性的測定原理:未致敏的家兔紅細(xì)胞(RE)(有類似酵母多糖或菊糖對人補(bǔ)體的作用)可在含Mg2+的EGTA緩沖液稀釋的人血清中激活A(yù)P,引起溶血。溶血的程度可反映AP活性。
試劑:
(1)0.1mol/LEGTA:取NaOH3.5g,溶于蒸餾水85ml中,加入EGTA(乙二醇雙乙胺醚四乙酸)19g使之溶解,補(bǔ)足蒸餾水至500ml。
(2)巴比妥緩沖原液:NaCl121.25g,巴比妥1.44g,巴比妥鈉0.94g,蒸餾水補(bǔ)足500ml。
(3)稀釋液:0.1mol/LEGTA80ml,巴比妥緩沖原液180ml,MgCl2·6H2O0.41g,蒸餾水補(bǔ)至1000ml,以1mol/LNaOH調(diào)pH至7.5。
(4)0.5%RE懸液:取保存于Alsever液的RE以生理鹽水洗2次,稀釋液洗1次后配成0.5%懸液(RE3×108/ml)。
(5)被測血清:被測血清分離后立即置-20℃保存,用前以稀釋液1∶4稀釋,37℃水浴10min。
(6)50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管:取0.5%RE0.2ml,加入蒸餾水0.8ml。
操作方法:按表1加入各反應(yīng)液。
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