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取材:血液
抗浸出性核抗原抗體的測(cè)定原理:
(1)對(duì)流免疫電泳法:為經(jīng)典的檢測(cè)抗ENA抗體(主要包括抗RNP和抗Sm兩種抗體)的方法。其原理是于瓊脂糖凝膠板成對(duì)打孔,將待測(cè)血清加至陽極側(cè)孔內(nèi),于電場(chǎng)中泳動(dòng)20min,再于陰極側(cè)孔內(nèi)加ENA抗原.繼續(xù)電泳30min,若待測(cè)血清中有相應(yīng)的抗體存在,即可在兩孔之間的適當(dāng)位置形成沉淀線。據(jù)此來判斷抗ENA抗體的有無。該法主要用于檢測(cè)抗Sm和抗U1-RNP抗體,其優(yōu)點(diǎn)是較瓊脂糖擴(kuò)散法敏感、快速,可于2h觀察結(jié)果。
(2)免疫印跡法:將ENA抗原進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),使所含多肽抗原分離;再用電轉(zhuǎn)印法將抗原轉(zhuǎn)印于硝酸纖維素膜上。將待測(cè)血清與膜條上的抗原反應(yīng),用酶標(biāo)記抗人IgG作為二抗,加酶底物溶液顯色。根據(jù)膜條上顯色區(qū)帶的位置,參比陽性對(duì)照,即可判斷有無某種抗ENA多肽抗體的存在。此法可一次檢測(cè)抗Sm、抗U1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗Scl-70和抗核糖體(Rib)等7種多肽抗體。
(3)間接免疫熒光法:實(shí)驗(yàn)基質(zhì)多采用Hcp-2細(xì)胞或靈長(zhǎng)類動(dòng)物肝臟的冷凍切片,其原理可參看本章抗核抗體測(cè)定,分別出現(xiàn)各自特定的免疫熒光模式(表1)。
試劑:同間接免疫熒光法。
操作方法:同間接免疫熒光法。
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