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1.適應(yīng)證:天皰瘡、類天皰瘡、紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚血管炎等免疫性皮膚病。
2.標(biāo)本的選擇及取材與皮膚組織病理檢查基本相同。
3.標(biāo)本處理:
①將需要的皮膚標(biāo)本用手術(shù)或鉆孔取下后,立即用OCT復(fù)合物包埋劑包埋固定或?qū)?biāo)本用濕潤(rùn)的生理鹽水紗布包裹,4℃下保存,24小時(shí)內(nèi)用OCT復(fù)合物包埋劑包埋。
②OCT復(fù)合物包埋劑包埋的標(biāo)本,經(jīng)速凍后在-22℃~-25℃條件下將組織切成厚度為4~6μm的薄片,置于玻片上。
4.直接免疫熒光法:將冷凍切片用0.01mol/L、pH7.4的PBS清洗10分鐘,晾干后滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗人免疫球蛋白抗體,在37°C濕盒中孵育30~60分鐘,再用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗滌3次后晾干,用碳酸甘油緩沖液封片,置于熒光顯微鏡下觀察。
5.間接免疫熒光法:標(biāo)本來(lái)自正常人皮膚或動(dòng)物組織(如鼠肝印片);首先將滅活的適當(dāng)稀釋的患者血清滴于標(biāo)本上,置于37℃濕盒中30~60分鐘,再用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗滌3次,晾干,后續(xù)步驟同直接法。
6.鹽裂皮膚免疫熒光法:取患者的皮損或正常人皮膚標(biāo)本,置于1mol/L的NaCl溶液中,放在4℃冰箱中用磁力攪拌器低速攪動(dòng),每24小時(shí)換液一次,經(jīng)過(guò)72小時(shí)左右,表皮與真皮分離,OCT包埋進(jìn)行DIF或IIF檢查。
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三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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