其他皮膚病醫(yī)院國營(yíng)
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取材:血液
硝基四唑氮藍(lán)試驗(yàn)的測(cè)定原理:中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗驟增、糖代謝活躍、6-磷酸葡萄糖氧化脫氫成為戊糖。所脫的氫還原淡黃色的硝基藍(lán)四氮唑(NBT)成為藍(lán)黑色的點(diǎn)狀或塊狀顆粒,沉積于中性粒細(xì)胞的胞漿中,其折光性很強(qiáng),在油鏡下很易識(shí)別。
試劑:
(1)2.0g/LNBT生理鹽水溶液:取NBT20mg,加于10ml生理鹽水中,置80℃水浴,攪拌溶解,先用濾紙過濾,再經(jīng)G6除菌,分裝,放4℃冰箱保存?zhèn)溆谩T囼?yàn)前新鮮配制NBT應(yīng)用液,取2.0g/LNBT生理鹽水溶液加等量下述緩沖液,混合后即可。
(2)pH7.20.15mol/L磷酸葡萄糖生理鹽水緩沖液:0.15mol/LNa2HPO4,70ml;0.15mol/LKH2PO4,30ml;葡萄糖100mg,混合溶解,過濾,分裝,55.16kPa,高壓滅菌20min,置冰箱保存。
操作方法:
(1)取肝素(100u/ml)抗凝血0.1ml放入凹玻片中,加NBT應(yīng)用液0.1ml和NBT應(yīng)用液0.1ml,混勻。置濕盒中,37℃15min(其間振搖1次)再移室溫15min。
(2)取1滴混合液,推成薄片,晾干。
(3)用甲醇固定3min,吹干,加10.0g/L沙黃水溶液染色5min(也可用50.0g/L甲基綠水溶液染色15min,或用姬姆薩-瑞氏染液染色),水洗,晾干。
(4)用顯微鏡檢查,凡中性粒細(xì)胞的胞漿內(nèi)含有斑點(diǎn)狀或塊狀深藍(lán)色物質(zhì)沉著的為NBT陽性細(xì)胞,細(xì)胞核有不同程度的退行性變,細(xì)胞有時(shí)腫大。共計(jì)數(shù)100~200個(gè)中性粒細(xì)胞,計(jì)其NBT陽性細(xì)胞百分率。
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