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(1)單向免疫擴散法:
①澆瓊脂板時注意避免產(chǎn)生氣泡。
②稀釋血清、抗血清所使用的吸量管必須固定。稀釋參考血清和患者血清皆用統(tǒng)一校正過的吸管,否則要用同一根吸管。其他器材也最好統(tǒng)一。
③所用瓊脂濃度一定要嚴(yán)格控制,分裝后防止干燥,不要反復(fù)溶解。溶解時不要煮沸時間過長,以防水份蒸發(fā)。56℃溫度要嚴(yán)格,太熱會破壞血清,太冷易凝固。混合要迅速、充分。
④加好血清后放的位置一定要保持水平,以防擴散圈變形。
⑤受檢者血清須新鮮。如條件不許可,可將血清冰凍保存或稀釋后保存,數(shù)天之內(nèi)影響不大,時間久后易使C3值增高。
(2)火箭免疫電泳法:
①試驗前首先要找出合適的抗血清濃度,使沉淀峰高度適中,峰形清晰。做法是用參考標(biāo)準(zhǔn)物稀釋幾個濃度做實驗,使峰高確定在一定范圍(2~5cm)。以滿意的峰高峰形將抗血清濃度確定下來。在此基礎(chǔ)上,再用參考標(biāo)準(zhǔn)物稀釋各種濃度作為抗原進行測定,以選擇出最適血清標(biāo)本稀釋度,即選出其測定結(jié)果基本上與參考標(biāo)準(zhǔn)物含量一致的稀釋度,作為血清標(biāo)本的最適稀釋度。
②測定補體蛋白時,血清分離后應(yīng)立即使用。
③抗原用戊二醛醛化,在C3電泳中可促進負(fù)離子的泳動。
④PEG可抑制免疫復(fù)合物解離,促進免疫復(fù)合物進一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀,有助于提高試驗的靈敏度。
⑤本法靈敏度為5.65μg/ml,CV為1%。
⑥其他同單向火箭免疫電泳。
沒有不適宜人群。
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