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免疫比濁法:
①透射比濁法:
A.抗血清濃度選擇:與參考品進行方陣滴定,最適稀釋度的原則為:保持抗體過量,線性范圍較寬,與相應Ig反應后產(chǎn)生濁度較高。
B.標準曲線:將Ig參考品用稀釋液稀釋成不同濃度:IgG5.0、9.0、13.0、17.0、21.0g/L;IgA1.0、2.0、3.0、4.0、5.0g/L;IgM0.5、1.2、1.9、2.6、3.3g/L。每個稀釋度設3支復管,每管25μl。加入最適稀釋度抗血清,每管2.5ml。37℃水浴1h(IgG)或2h(IgA、IgM)后,用濁度計或比色計在495nm測吸光度。以Ig濃度為橫坐標,其吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
C.標本檢測:檢測步驟與制備標準曲線相同。測IgG時,待檢血清1∶40稀釋;測IgA、IgM時1∶5稀釋。每批試驗同時制標準曲線,并設標本對照(標本加稀釋液)和抗血清對照。
②終點散射比濁法:用專用比濁管加入緩沖液0.6ml、1∶36(測IgG、IgA、IgM、C3、C4等)或1∶216(測IgG)稀釋樣品50μl,再加入抗血清50μl,混勻后37℃水浴30min。用激光免疫比濁儀,按預測項目(如IgG或IgA)鍵,以空白管(不加抗血清)調(diào)零,按測定鍵,測定各管,即顯示所測項目含量。
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