中和試驗(yàn)

基本信息

專科分類： 傳染病檢查
檢查分類： 免疫檢查
適用性別： 男女均適用
是否空腹： 　非空腹
手術(shù)參考價(jià)： 30元
科　室： 傳染病檢查

中和試驗(yàn)檢查簡介

中和試驗(yàn)是病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，失去對易感動物的致病力的試驗(yàn)方法。

中和試驗(yàn)檢查過程

(一)簡單定性中和試驗(yàn)：

本法主要用于檢出病料中的病毒，亦可進(jìn)行初步鑒定或定型。先根據(jù)病毒易感性選定試驗(yàn)動物(或雞胚、細(xì)胞培養(yǎng))及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度(約100LD50～1000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、鏈霉素各200～1000單位)，或用細(xì)菌濾器過濾，與已知的抗血清(適當(dāng)稀釋或不稀釋)等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對照?；旌虾笾?7℃1h，分別接種實(shí)驗(yàn)動物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發(fā)病和死亡情況。對照動物死亡，而中和組動物不死，即證實(shí)該病料中含有與該抗血清相應(yīng)的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鑒定和分型。

(二)固定血清稀釋病毒法：

本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對照組)，第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)?；旌虾?，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動物，每一稀釋度用3～5只動物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數(shù)，觀察結(jié)束后，計(jì)算LD50和中和指數(shù)(表7-1、表7-2)，本法適用于大量檢樣的檢測。

本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體，對病毒而言，通常中和指數(shù)大于50者判為陽性，10～49為可疑，小于10為陰性。

(三)固定病毒稀釋血清法：

本法用以測定抗病毒血清的中和價(jià)，將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價(jià)的病毒液(與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻后，置37℃作用1h，接種實(shí)驗(yàn)動物。

注：

[1]接種劑量0.1ml，含病毒100LD50;

[2]系指與病毒混合后的稀釋度;

[3]分母為接種數(shù)，分子為保護(hù)數(shù);

[4]PD50為半數(shù)保護(hù)，其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。

(四)空斑減少法：

在細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)，近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度，使每0.2ml含80個～100個PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分別測定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價(jià)。

注：

[1]血清用4倍遞增稀釋;

[2]空斑減少50%的血清稀釋度，其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。

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