β-內(nèi)酰胺酶

基本信息

專科分類： 傳染病檢查
檢查分類： 生化檢查
適用性別： 男女均適用
是否空腹： 　非空腹
手術(shù)參考價(jià)： 45元
科　室： 傳染病檢查

β-內(nèi)酰胺酶檢查簡(jiǎn)介

β-內(nèi)酰胺酶是指能催化水解生物分子中β-內(nèi)酰胺環(huán)中的的酰胺鍵的滅活酶。細(xì)菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制。β-內(nèi)酰胺酶類抗生素包括青霉素類,頭孢菌素類,非典型β-內(nèi)酰胺類等,是品種最多,研究進(jìn)展最快,臨床應(yīng)用最廣泛的一大類藥物。

β-內(nèi)酰胺酶檢查過程

β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)

臨床標(biāo)本中分離金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及最近發(fā)現(xiàn)的腸球菌屬少數(shù)菌株對(duì)青霉素、氨芐青霉素出現(xiàn)耐藥。由于上述菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶水解前述抗生素。檢測(cè)該酶有下列方法：

(一)微生物活性消失法

此法是以一株對(duì)青霉素高度敏感的枯草芽胞桿菌的指示菌，如待檢菌株產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶，破壞了青霉素，則在劃線兩邊有枯草芽胞菌生長，否則指示菌仍呈很大抑菌環(huán)。

(二)淀粉-碘測(cè)定法

β內(nèi)酰胺酶破壞β內(nèi)酰胺環(huán)，碘與被打開β內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合，使藍(lán)色的淀粉-碘復(fù)合物轉(zhuǎn)變成無色。

方法：用pH6.0磷酸緩沖液配制青霉素懸液6000μg/ml，取該液0.1ml置于微量稀釋板凹孔中，挑選檢測(cè)菌株數(shù)個(gè)菌落混懸于其中，搖動(dòng)30min，靜置室溫中1h，加淀粉液2滴，再加碘液1滴，混合，立即觀察顏色變化，陽性者當(dāng)加入碘液后，首先立即出現(xiàn)藍(lán)色、如在10min內(nèi)消失藍(lán)色，提示該菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。

(三)酸測(cè)量法

青霉素被β-內(nèi)酶胺酶水解后成青霉素酸，pH值下降6.8以下，用酚紅指示劑，由紅(紫)色(原液：枸櫞酸緩沖液pH8.5)→黃色(pH6.8以下)。

(四)頭孢硝基噻吩顯色反應(yīng)

頭孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-內(nèi)酰胺環(huán)被β-內(nèi)酰胺酶打開，基質(zhì)由黃色變成紅色。

液體方法：10mg頭孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亞砜中，然后用0.1mol/LPBS(pH7.0)再稀釋1：20，最后濃度為500μg/m1，溶液呈黃或淡橙色，保存4～10℃，可用幾個(gè)星期。取該溶液0.05ml置放于微量稀釋板凹孔中或小試管中，挑取被試菌落，制成濃厚懸液，與凹孔中基質(zhì)液混和，室溫10～30min，頭孢硝基噻吩由黃變成紅色為陽性，若顯色不明顯，觀察可延長6h。

有報(bào)道紙片法用于流感嗜血桿菌和淋病奈瑟菌檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的結(jié)果是準(zhǔn)確的，但對(duì)于某些菌株產(chǎn)生少量而與菌細(xì)胞緊密結(jié)合的β-內(nèi)酰胺酶，如腐生葡萄球菌等，用液體法檢測(cè)更好。上述任何一種檢測(cè)方法都應(yīng)用質(zhì)量控制。

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